Orientações pré-analíticas MALDI-TOF

ORIENTAÇÕES PRÉ-ANALÍTICAS DO USO DO MALDI- TOF NA IDENTIFICAÇÃO MICROBIANA

Este é um documento elaborado pela equipe executora com objetivo de orientar os usuários do MALDI-TOF Biotyper® Sirius One RUO System na preparação dos microrganismos que serão identificados.

1) BACTÉRIAS

a) GRAM-POSITIVAS E GRAM-NEGATIVAS (cepas refrigeradas em geladeira)

• Ao retirar da geladeira, deve-se realizar pelo menos 1 repique da colônia bacteriana;
• O repique deve ser realizado EM PLACA contendo meio de cultura solido (ágar Sangue, ágar MacConkey, ágar CLED entre outros) a depender da necessidade bacteriana (pode-se dividir a placa em vários espaços por cepa, cuidado para que não ocorra sobreposição de crescimento bacteriano)
• Encaminhar ao laboratório para análise com no máximo 24 horas.

b) GRAM-POSITIVAS E GRAM-NEGATIVAS (cepas congeladas -20°C ou -80°C)

• Ao retirar do freezer, as cepas devem passar por 2 repiques sucessivos.
• O último repique deve ser realizado EM PLACA contendo meio de cultura solido (ágar Sangue, ágar MacConkey, ágar CLED entre outros) a depender da necessidade bacteriana (pode-se dividir a placa em vários espaços por cepa, cuidado para que não ocorra sobreposição de crescimento bacteriano).
• Encaminhar ao laboratório para análise com no máximo 24 horas.

c) ÁCIDO-LÁCTICAS (cepas refrigeradas e/ou congeladas)

• Ao retirar da geladeira e/ou freezer, as cepas devem ser revitalizadas em caldo enriquecido (MRS) e realizar pelo menos 2 repiques sucessivos.
• O último repique deve ser realizado EM PLACA contendo meio de cultura solido (AMRS em anaerobiose) para crescimento bacteriano (pode-se dividir a placa em vários espaços por cepa, cuidado para que não ocorra sobreposição de crescimento bacteriano).
• Encaminhar ao laboratório para análise com no máximo 24 horas.

 2)  FUNGOS

a) LEVEDURAS (cepas refrigeradas em geladeira)

• Ao retirar da geladeira, deve-se realizar pelo menos 2 repiques sucessivos da colônia fúngica;
• O último repique deve ser realizado EM PLACA contendo meio de cultura solido (ASD ou ABHI ou CROMagar entre outros) para crescimento fúngico (pode-se dividir a placa em vários espaços por cepa, cuidado para que não ocorra sobreposição de crescimento fúngico)
• Encaminhar ao laboratório para análise com no máximo 24 - 48 horas para suspeita de Candida; 72 horas quando a suspeita for Cryptococcus.

b) LEVEDURAS (cepas congeladas -20°C ou -80°C)

• Ao retirar do freezer, as cepas devem ser revitalizadas em caldo enriquecido (BHI ou CSD) e realizar pelo menos 2 repiques sucessivos.
• O último repique deve ser realizado EM PLACA contendo meio de cultura solido (ASD ou ABHI ou CROMagar entre outros) para crescimento fúngico (pode-se dividir a placa em vários espaços por cepa, cuidado para que não ocorra sobreposição de crescimento fúngico)
• Encaminhar ao laboratório para análise com no máximo 24 - 48 horas para suspeita de Candida; 72 horas quando a suspeita for Cryptococcus.

c) FUNGOS FILAMENTOSOS (cepas refrigeradas)

• Cada fungo filamentoso tem seu PRÓPRIO TEMPO DE CRESCIMENTO em meios usuais, o amadurecimento da colônia deve ocorrer até a formação de micélio vegetativo e micélio reprodutivo mínimo;
• Ao retirar da geladeira, as colônias devem ser revitalizadas em caldo enriquecido (BHI ou CSD) e realizar pelo menos 2 repiques sucessivos.
• O último repique deve ser realizado EM PLACA contendo meio de cultura solido (ASD ou ABHI ou CROMagar entre outros) para crescimento fúngico (pode-se dividir a placa em vários espaços por cepa, cuidado para que não ocorra sobreposição de crescimento fúngico)
• Fungos de crescimento exuberante (por exemplo, Rhizopus spp.), sugere-se que estes sejam repicados em meio de forma isolada;
• O tamanho da colônia ideal depende da espécie ensaiada e das condições de cultivo, como orientações gerais, ideal que a colônia tenha pelo menos 1cm² de halo de crescimento.
• Tempo de incubação também é variável, na tabela abaixo fazemos algumas sugestões:

*observar halo de tamanho da colônia